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“稳定型萤火虫荧光素酶报告基因检测试剂盒”参数说明
| 是否有现货： | 是 | 类型： | 生物碱 |
| 型号： | Luc-100 | 规格： | 100 毫升 |
| 商标： | 炎熙生物 | 包装： | 盒 |
| 产量： | 10000 |
“稳定型萤火虫荧光素酶报告基因检测试剂盒”详细介绍
稳定型萤火虫荧光素酶报告基因检测试剂盒
Steady Firefly Luciferase reporter Assay Kit
Steady Firefly Luciferase reporter Assay Kit
货号规格
Luc-1010毫升
Luc-100100毫升
产品原理：
萤火虫荧光素酶报告基因检测试剂盒(Firefly Luciferase Reporter Gene Assay Kit)，是一种以荧光素(luciferin，也称萤光素)为底物， 检测荧光素酶(firefly luciferase， 也称萤光素酶)活性的试剂盒。萤火虫荧光素酶是一种分子量约为61 KD的蛋白，在ATP、镁离子和氧气存在的条件下， 可以催 化luciferin氧化成oxyluciferin。在luciferin氧化的过程中，会发出生物发光(bioluminescence)。生物发光可以通过化学发光仪(luminometer)或液闪测定仪进行测定。通过荧光素和荧光素酶这一生物发光体系，可以非常灵敏、高效地检测基因的表达。通常把所研究基因的转录调控元件或 5’启动子区克隆在luciferase基因的上游，或把3’-UTR区克隆在luciferase基因的下游， 构建成报告基因(reporter gene)质粒，然后转染细胞，用适当方法处理细胞后，测定荧光素酶的活性。通过荧光素酶活性的高低，来判断处理方法对目的基因的转录调控的影响。稳定型萤火虫荧光素酶报告基因检测试剂盒通过成分优化，可以使信号值保持长时间稳定，非常适合高通量筛选的要求。
保存条件：-20ºC避光保存6个月有效，-80ºC避光保存，一年有效。尽量避免反复冻融。
使用方法：
- 室温下融解稳定型荧光素酶报告基因检测试剂盒，同时将培养好的细胞从培养箱中取出，在二者都达到室温且温度一致时，开始下一步实验；
- 向细胞加入与培养基等体积的稳定型荧光素酶检测试剂，并在室温下平缓振摇孵育至少5分钟，以使细胞充分裂解，此过程可以用锡箔纸覆盖避光。不论细胞培养在何种器皿中，加入与培养基等体积的荧光素酶检测试剂即可；
- 开启化学发光仪或具有检测化学发光功能的多功能酶标仪，设置适当参数；
- 进行读数，可以直接在96孔板或384孔板中读数，也可以吸出100-200微升到发光管中进行读数。本产品信号值非常稳定，半衰期大于5小时，可达到高通量筛选的要求。
报告基因优点缺点
萤光素酶优越的灵敏度需要底物
高信号值
无内源活性
需要底物
- （葡糖醛酸糖苷酶）
植物中内源活性低酶的扩散可引起 “过度报告”
需要底物
- （分泌性碱性磷酸酶）
需要底物
- （氯霉素转乙酰基酶）
易于使用灵敏度底
设备现成(液闪仪,层析)
- 50ｈ半衰期
- （绿色荧光蛋白）
不需底物折叠 “情形” 可导致信号差别
- 灵敏度高，最低可检测10‐\20摩尔荧光素酶分子，比Western Blot灵敏度高1000倍以上；
- 检测范围广，在10-16 M(10 pg/L)至10-8 M(1 mg/L)范围内,光强度与荧光素酶浓度成正比；
- 发光检测，检测方便，内源性低，哺乳动物无内源性表达，荧光素酶检测不受细胞内其他物质影响；
- 试剂盒成分经过优化处理，可以使信号值保持长时间稳定，半衰期大于5小时，非常适合高通量筛选的要求。
1、启动子核心区域检测，增强子/抑制子等调控子核心元件检测；
2、启动子/增强子与转录因子的相互作用，启动子区可能的转录因子结合位点检测；
3、细胞信号转导途径研究；
4、病毒/细胞相互作用；
5、药物等化学诱导因素或射线等物理诱导因素对启动子活性的调节（抑制或增强）。
注意事项：
- 常见培养基如RPMI1640、DMEM、F-12、MEM等，以及酚红、血清、PBS和其他缓冲液等，都不影响荧光素酶检测试剂的使用。稳定型荧光素酶检测试剂经过成分优化处理，可使信号值保持稳定，半衰期大于5小时，非常适合高通量筛选的要求。
- 由于温度对酶反应有影响，所以样品和试剂均需达到室温后再进行测定。
- 为保证荧光素酶检测试剂的稳定，可以采取适当分装后避光保存的方法，以避免反复冻融和长时间暴露于室温；经测试，反复冻融三次，对测定结果无明显影响。
- 细胞如果在96孔或384孔板中直接读数，需要使用白色或黑色不透明的培养板，以免发生孔与孔之间的信号干扰。
- 为避免由于质粒转细胞时效率的差异而带来的误差，可以同时转入海肾荧光素酶(Renilla luciferase)的报告基因质粒或β-半乳糖苷酶(β-galactosidase, β-gal)的报告基因质粒等作为内参。
- 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
